Giorgis Isaac,1Michael D. Jones,1Besnik Bajrami,1Wassim Obeid,2James Langridge,3Patrick Hatcher2
1沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德)
2欧道明大学(美国弗吉尼亚州诺福克)
3沃特世公司(英国曼彻斯特)
应用优势
■展示根据链长和双键数量分离多种游离脂肪酸(FFA)
■无需衍生化，可实现更简单快速的样品制备，避免干扰
■有机溶剂提取物可直接进样至系统中，节省了每次分析的时间和成本
■三分钟内即可完成色谱分离，速度比GC/MS快10倍
■与GC/MS不同，借助UPC22®可以轻松分析低挥发性的极长链脂肪酸(>24个碳原子)
沃特世解决方案
ACQUITY UPC2TM 系统
TransOmics™ 信息学软件
Xevo® G2 QTof 质谱仪
ACQUITY UPC2 HSS 色谱柱
简介
游离脂肪酸和构成复合脂质的脂肪酸都在代谢中发挥着一些关键作用--作为主要的代谢燃料(储存和运输能量)、所有细胞膜必不可少的成分和基因调控因子。此外，膳食中的脂质可提供多不饱和脂肪酸，这类脂肪酸是功能强大的局部作用代谢产物(如类花生酸)的前体。常见的动植物来源脂肪酸均为偶数链，每条链含16至24个碳原子，并具有0到6个双键。但是大自然中总有着无数的例外，实际上甚至还存在多达近100个碳原子的奇数碳和偶数碳脂肪酸。此外，双键可以为顺式(Z)和反式(E)构型，也可以具有各种其它结构特征，包括分支点、环、含氧官能团等等。
脂肪酸链可以在特定的位点含有一个或多个双键(具有顺式(Z)或反式(E)构型的不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸)，也可以是完全饱和的。LIPIDMAPS脂肪酸系统命名法用“?”指示双键相对于羧基的位置1。脂肪酸结构在分子的一端(指定为Omega，ω)含有一个甲基，另一端为羧基。靠近羧基的碳原子称为α碳，紧接着下一个碳原子则称为β碳。通常，还会使用字母“n”代替ω，以指示离甲基端最近的双键位置2。图1展示了不同直链脂肪酸的结构。
从生物材料中分离游离脂肪酸(FFA)是一项复杂的工作，必须随时注意防止或尽量减少水解酶的影响。完成分离后，可通过典型的色谱方法对脂肪酸进行分析，包括气相色谱/质谱法(GC/MS)和液相色谱-串联质谱法(LC/MS/MS)。但是，这些方法都有着各自的不足之处。
例如，GC法需要将脂肪酸进行衍生化，以便水解并转化为甲酯，这一过程不仅耗时，而且在衍生化过程中还存在脂肪酸重排的风险，使得无法确定形成的酯是来自FFA还是完整的复合脂质。此外，对于具有高分子量(>C24)的低挥发性极长链脂肪酸来说，即使在脂肪酸甲酯(FAME)衍生化后，其GC/MS分析依然存在问题。
本文介绍的UPC2/MS FFA分析是一种简便快速的方法，与其它诸如GC/MS等需要进行FAME衍生化的技术相比，可显著缩短分析时间。此外，含有脂质的有机层提取物可以直接进样至系统中，无需溶剂交换即可兼容反相LC方法。
