下面是关于荧光光谱测量的步骤，是一篇新手友好型的操作小指南！面对未知样品，没有操作经验的伙伴儿们也能从容测试哦！
当测量未知样品的荧光时，首先最 好先测量一下样品的吸光度。 荧光与吸收光成正比，因此可以确定最 大吸收波长。 爱丁堡稳态瞬态荧光光谱仪FLS1000或FS5型号，均能够实现吸光度和荧光测试功能。在实际测试时，由于有些样品的激发光谱和发射光谱之间可能存在一些重叠。因此，通常可以选择一个比这个最 大吸收波长位置更短的波长作为激发波长。
下面这个样品的实例是使用FS5 测试蒽环己烷溶液中的吸收光谱。最大吸收值大约为0.1, 通常为避免内滤效应。我们将溶液浓度控制在0.1以下。在此基础上，可以将蒽环己烷溶液样品的激发波长设置为~355 nm或~375 nm。
在FS5上测试的蒽环己烷溶液的吸收光谱图
接下来， 激发和发射波长可以进行调整，以最 大限度地提高感兴趣的信号。同时可以调节激发和发射侧单色器狭缝，从而让更多的光通过。需要注意是，增加狭缝获取更高信号的同时，会降低光谱分辨率(即光谱线的分辨率)。测试时增加信号强度cps，以获得良好的信噪比，但应低于探测器饱和极限：标准PMT检测器的饱和极限是150万cps。当单位时间内过多的光子照射至探测器时，将使测试数据失真，测试谱图扭曲；甚至有可能损坏检测器。
当测试条件优化好后，可以在光谱仪软件中进行测试参数的设置。爱丁堡光谱仪的测试窗口可以进行波长范围Scan range、步进step、停留时间Dwell time和重复次数Number of scans等参数。如下面测试窗口所示。停留时间（在每个测试步进点下的积分时间）和扫描次数对总采集时间有贡献。显然，更长的集成时间将提高数据的质量。同时，背景扣除和校正文件的选项也可以在对话框中进行勾选使用。
仪器软件在获取数据时绘制数据图，生成如下图所示的荧光光谱。
面对未知样品，荧光测试是不是没有想象中的那么难，你学会了吗？
