浙江省市场监督管理局拟批准发布《猫细小病毒 PCR 检测方法》省级推荐性地方标准，根据《浙江省地方标准管理办法》的规定，现公开征求社会各界对标准报批文本的意见，公开征求时间截止2020年6月28日。有关单位和个人如有意见建议，可通过来信、来电、来访等形式，向浙江省市场监管局标准化处反映。单位反映的意见建议请加盖单位公章，个人反映的请署真实姓名。逾期不再接受意见建议。

       联系人：浙江省市场监督管理局标准化处 浙江省市场监督管理局地方标准技术审查部 电子邮件：zjbz2012@126.com

       节选该标准部分内容：

       适用范围：

       本标准规定了猫细小病毒PCR(polymerase chain reaction)的实验条件、操作步骤、结果判定。本标准适用于猫细小病毒(猫泛白细胞减少症病毒)的检测。　　

       规范性引用文件：

       《GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法》。

       仪器设备

       1、高速冷冻离心机：要求最大离心力在 12 000rpm 以上。

       2、PCR 扩增仪。

       3、核酸电泳仪和水平电泳槽。

       4、微波炉。

       5、分析天平。

       6、恒温水浴锅。

       7、冷藏冰箱和低温冷冻冰箱。

       8、微量移液器。

       9、凝胶成像系统(或紫外透射仪)。

       10、高压灭菌锅。

       11、超净工作台或生物安全柜。

       样品的采集和处理

       采集动物粪便、肛拭子、全血或肠道等组织样品并进行处理：

       a) 肛拭子、粪便(加适量 PBS)等样品经 4 ℃ 5 000 rpm/min 离心 2 min，取上清液；

       b) 全血样品待血凝后经 5 000 rpm/min 离心 2 min，取血清;

       c) 取 0.1 g 肠道等样品与灭菌 PBS(全称、浓度)按 1：5 的重量体积比制成悬液，匀浆后，反复冻融 3 次，在涡旋混合器上混匀后经 4 ℃ 5 000 rpm/min 离心 10 min，取上清液。

       制备的样品在 2 ℃～8 ℃保存时间不应超过 24 h，长期保存应分装成小管，置于-20 ℃以下，避免反复冻融。

       PCR 反应

       反应体系组成

       设立阳性对照和阴性对照。按表 1 所述反应体系组成，严格在冰盒上配置 25 µL PCR 扩增体系。


       电泳

       盖好电泳仪，插好电极，5 V/cm 电压电泳，30 min～45 min(指示试剂跑至 1/3 处)。

       结果观察

       用紫外凝胶成像仪或者紫外透射仪观察扩增结果。