BTN70904 酵母tRNA溶液说明书

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BTN70904 酵母tRNA溶液说明书
 
 

产品编号:BTN70904

规格:1.5mL(A)/1.5mL(B)

产品及特点

本产品分A 和B 两个规格,浓度均为5mg/mL。A 是酵母tRNA 粗提液,用作制备更高纯度(如分子生物级)酵母tRNA 的原材料。B 是精提液,是经过本公司柱式RNAclean 纯化的分子生物学级别的酵母tRNA 溶液,不含蛋白质和DNA污染,OD260/OD280 在1.9 左右,可直接用作微量RNA 提取和回收的助沉剂,也可以用作原位杂交、Northern 杂交的封堵剂,对于探针为RNA 的杂交试验尤其适用。

规格及成分:

成分

1.5mL(A)

1.5mL(B)

酵母tRNA溶液

1.5ml(粗提液)

1.5ml(精提液)

说明书

1份

1份

保存条件:

低温运输,-20℃保存,有效期一年。

使用方法:

一:以tRNA 粗提液(BTN70904A)为材料,酚法制备tRNA 精提液(BTN70904B)

1. 在1 倍体积的tRNA 粗提液中加入一倍体积的自备Tris 饱和酚,振荡混匀后12000-15000 g 离心3 分钟得上清。

2. 在上清中再加入一倍体积的自备Tris 饱和酚和0.2 倍体积自备的氯fang,振荡混匀后12000-15000 g 离心3 分钟得上清。

3. 重复此步直到酚相和水相之间没有白膜出现。一般需要2-4 次抽提。

4. 在上清中加入0.1 倍体积的自备3M NaAc(pH5.2)和2 倍体积的自备无水乙醇,振荡混匀。

5. 12000-15000 g 离心15 分钟以上,小心移弃上清。

6. 用1mL 自备 75%乙醇洗一次(即加入1mL 75%乙醇,振荡混匀后12000-15000 g 离心5 分钟,小心移弃上清)。

7. 短暂离心数秒,小心移弃残留液体,所得沉淀即是精提的酵母tRNA,可以溶解在自备的DEPC 水中,UV 测定其浓度,然后直接用于各种分子生物学实验。

注意:tRNA 比较短,又是单链,所以电泳时结合EB 等染料的能力很弱,测定其浓度时zui好不要使用电泳比较法,而要使用分光光度法。

注意:此法得率较高,但缺点是不能去除部分多糖污染,因为多糖也能在醇沉淀时沉淀下来。如果zui后得到的溶液带颜色,则需要用本公司柱式RNAclean 精提,详细过程见该产品使用说明书。

二:tRNA 精提液(BTN70904B)作为核酸助沉剂

1. 在核酸(DNA 或/和RNA)溶液中,加入适当浓度的盐离子,盐离子不同其终浓度也不相同,具体如下:

终浓度

NH4OAc (醋酸铵)

0.5M

NaCl (氯化钠)

0.25M

NaOAc (醋酸钠)

0.3M

2. 加入本产品使其终浓度为20 μg/mL,混合均匀。

3. 加入两倍体积的乙醇,混合均匀。

4. 冰上放置15 分钟。

5. 12000-15000 g 离心15 分钟以上,小心移弃上清。

6. 用1mL 75%乙醇洗一次(即加入1mL 75%乙醇,振荡混匀后12000-15000g 离心5 分钟,小心移弃上清)。

7. 短暂离心数秒,小心移弃残留液体。

8. 将沉淀溶于适当缓冲液中待用。

注:由于tRNA 是多聚核苷酸激酶和末端转移酶的底物,因此如果回收的DNA 或RNA 要用于此类反应,就不能使用tRNA 作为助沉剂。如果回收的RNA 要用于RT-PCR,使用tRNA 可能会对反应的特异性产生干扰。

二:tRNA 精提液(70904B)作为杂交封堵剂

本产品可以作为原位杂交、Northern 杂交和RNA 斑点杂交的封堵剂,也可以作为Southern 杂交和DNA 斑点杂交的封堵剂,但不适于作为菌斑杂交。其在杂交液或预杂交液中的终浓度为100μg/mL。

如果使用RNA 探针,zui好使用本产品做封堵剂,以保护RNA探针。

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日期: 2019-08-09
标签: 酵母 产品 特点
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