BTN70702 分枝杆菌DNA提取试剂盒说明书

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BTN70702 分枝杆菌DNA提取试剂盒说明书

产品编号:BTN70702

规格:50T

产品及特点

分枝杆菌属(Mycobacterium)是极为古老的细菌,与人类的疾病相关的就有25种以上,包括引起结核病的结核分枝杆菌(Mycobacteria tubercμLosis)。近年来由于多重耐药性分枝杆菌的出现,分枝杆菌再次成为人们关心的细菌。PCR快速诊断是目前检测分枝杆菌的主流方法,但由于此类细菌具有十分独特的坚硬的细胞壁,快速提取其基因组DNA一直是十分棘手的技术问题。本产品就是为解决这一问题而开发,具有下列特点:

1. 每克分枝杆菌湿重可以提取到3-4mg基因组DNA。

2. 操作简单,整个过程约60分钟左右,容易放量操作。

3. 适用于培养的分枝杆菌,也适用于含分枝杆菌的痰液等样品。

4. 价廉物美,与国外同类产品相比质量相当,但价格便宜。

规格及成分:

成分

规格

TE缓冲液

50ml

溶液A

7.5ml

溶液B

15 mL(棕色塑料瓶)

说明书

1份

保存条件:

常温运输及保存、有效期一年。

自备试剂:

fang、70%乙醇、无水乙醇。

使用方法

注意:文献报道部分分枝杆菌在DNA提取过程中还有形成菌落的能力,所以任何丢弃的溶液都必须按有传染性的污染物品对待,并严格按有关部门要求进行消毒处理。

: 如果细菌来于痰液样品,则按下面方法进行预处理(本试剂盒不提供所需试剂,操作步骤仅供参考)

1. 用痰液收集器收集约5mL患者深咳痰并转移到15mL塑料离心管中。

2. 加入等量的化痰液(2% NaOH、1.45%柠檬酸钠、0.5% N-乙酰-L-半胱氨酸),震荡使二者充分混匀。37℃放置25-40分钟。此步处理可以使粘稠的痰液便于操作,同时可以裂解不属于分枝杆菌的杂菌,只有分枝杆菌保持完整。

3. 5000 g离心5分钟,弃上清液。分枝杆菌将沉淀在管底,可以直接用于DNA提取。也可以保存在-20℃待用。

: 如果分枝杆菌来于培养的菌落,则按下面方法进行预处理

1. 刮取培养的菌苔到1 mL TE缓冲液中(装在1.5mL塑料离心管中)并充分震荡使细菌均匀重悬。如果是培养的液体菌液或其他液体样品材料,则取1mL菌液到1.5 mL塑料离心管中。一次提取所需zui佳细菌用量为109 CFU左右。

2. 80℃加热20分钟杀灭分枝杆菌使之失去传染性。

4. 常温5000 g离心5分钟,弃上清液。分枝杆菌将沉淀在管底,可以直接用于DNA提取。也可以保存在-20℃待用。

: 分枝杆菌基因组DNA提取

1. 将150μL 65℃预热过的溶液A加到上步得到的、有分枝杆菌沉淀的塑料离心管中,充分震荡使细菌均匀悬浮。

2. 再加入300μL溶液B(呈乳浊状)和300μL自备fang,充分震荡混匀。

3. 将混合液-20℃放置直到液体凝固,一般需要20-60分钟。一定要凝固后才能进入下一步。

4. 将样品管放室温融化后,12000-15000g室温离心5分钟,小心转移上清到一新的离心管中。

5. 在上清液中加两倍体积的无水乙醇,颠倒混匀后12000-15000g室温离心10分钟,小心弃上清。DNA将形成沉淀,不要丢失。

6. 在离心管中加1mL自备70%乙醇,短暂震荡,12000-15000 g室温离心3分钟,弃上清。此步洗涤残留盐离子等杂质。

7. 重复上述操作一次。

8. 短暂离心离心管,小心吸弃残留的液体(约50μL)。此步不要省略,否则残留的液体(含乙醇)将会影响DNA电泳、酶切和PCR等反应。

9. 立即加入50-100μL TE缓冲液充分溶解DNA沉淀。

10. 直接取5-10μL电泳检测DNA,其余放冰箱备用或用于后续反应。

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日期: 2019-08-09
标签: 试剂盒 产品 特点 细菌
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