BTN70303 绿如蓝核酸染料(UV型)说明书

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BTN70303 绿如蓝核酸染料(UV型)说明书
 

产品编号:BTN70303

规格:1.5mL

产品及特点

目前zui常见的替代EB 的核酸染料SYBR Green I(属于花氰类染料)虽然毒性比EB 低、灵敏度比EB 高,但由于其化学稳定性差(怕光、怕水、怕热),实验结果的重复性往往不尽人意;此外,SYBR Green I 在电泳过程中能在DNA 分子间移位,很容易使DNA 条带模糊和扭曲,电泳清晰度和分辨率也不如EB。所以在实际应用中依然不能有效替代EB。本产品是同时具有EB 稳定性和SYBR Green I 低毒性的新性核酸染料,其特点如下:

1. 低毒。其主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品,有利于保护使用者的健康和保护日益恶化的环境。

2. 灵敏。检测灵敏度跟EB 相当,能满足常规核酸电泳实验要求。

3. 稳定。对光、水和热的稳定性跟EB 相当,可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。

4. 无分子间位移现象。不会出现SYBR 染料常见的条带模糊和扭曲现象。

5. 使用方法多样。既可以加入熔化的胶中,也可以电泳后染色,还可用于PAGE。

6. 跟各种常用的核酸电泳缓冲液(如SuperBuffer-2、TBE、TAE)兼容,但在SuperBuffer-2 和TBE 中背景zui低。

7. 观察时不需要任何额外的仪器设备或UV 光源,可以使用现成的观察EB 的300nm UV。

8. 可用于 RNA 染色(也呈绿色)。

9. DNA 或RNA 浓度较高时还可以直接在日光下观察(需要将胶放在黑色背景下)。由于避免了UV 对DNA 的伤害,尤其适用于胶回收实验。

规格及成分:

成分

1.5ml

绿如蓝核酸染料, 10000×

1.5ml

说明书

1份

 

保存条件:

常温运输,4℃保存,有效期一年。

自备试剂:

电泳缓冲液和琼脂糖凝胶。

使用方法

注意:虽然本产品的主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品,但操作时zui好还是戴上塑料手套。

使用方法之一:电泳中染色DNA (RNA 的染色跟DNA 完全一样)。

本方法是将绿如蓝核酸染料直接加入溶化的凝胶中使用,只适用于琼脂糖凝胶电泳,不适用于PAGE。

1. 将绿如蓝核酸染料直接加入到融化的琼脂糖凝胶中,每100mL凝胶加3-10μL绿如蓝核酸染料,混合均匀后倒胶。琼脂糖凝胶中不能含任何其他染料(如EB 和SYBR Green I,否则会相互干扰)。在100mL 琼脂糖凝胶中加入绿如蓝核酸染料的量不要超过10 μL,否则背景将很强。注意:一定要保证琼脂糖彻底熔化,尤其是在一次熔化胶的时候,否则未熔化的小颗粒将产生跟染料相同的荧光。

2. 将 DNA 样品与DNA 上样液按比例混合后上样。注意:一定要使用不含SDS 等去污剂的上样液,否则SDS 会跟染料结合,极大地降低灵敏度。

3. 上样后电泳,电泳参数同常规的电泳。如果使用百奥莱博五分钟核酸电泳液SuperBuffer-2,需要较高电压,详见该产品说明书。

4. 电泳结束后在300 nm 左右 的UV 下观察。注意:不要使用波长为260 nm 或360 nm 的UV,否则检测灵敏度会降低。如果DNA 或RNA 浓度较高,还可以直接在日光下直接观察(需要将胶放在黑色背景下),避免UV 对DNA 的伤害,尤其适用于胶回收实验。

注:显色结果:在紫外下,DNA 浓度非常高的时候是白色,浓度低的时候是绿色的,单链核酸有时是红色的。

5. 用配置了520-550 nm 滤光片(一般呈黄色或深黄色)的相机拍照。注意:不要使用与EB 兼容的红色滤光片(它能阻挡520-550 nm 的光)。如果能再加上能滤去UV 的滤光片,效果会更好。

6. 后续 Southern、转膜或DNA 胶回收实验按常规操作进行。

使用方法之二:电泳后染色DNA

本方法是在电泳后对DNA 进行染色,适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE。但该方法需要单独的染色处理,染料用量较大,不推荐用于琼脂糖凝胶的染色。

1. 按照常规方法进行电泳。

2. 用去离子水将绿如蓝核酸染料稀释500 倍后(100 mL 水需要加0.2 mL 绿如蓝核酸染料),将凝胶放入,室温下摇晃染色30 分钟(对琼脂糖凝胶)或15 分钟(对PAGE)。

3. 用水脱色 10-30 分钟,具体时间需根据背景强弱决定,其余同方法一。

注意:电泳后染色液可以反复使用次数。

疑难解答:

Q:本产品可否用于RNA 染色?

A: 可以,不论RNA 是在甲醛变性胶中电泳,还是在普通的SuperBuffer-2、TBE 或TAE 胶中电泳,RNA 染色后在300nm 下都跟DNA一样呈绿色。

Q:本产品是否可以加入上样液中进行染色?

A:不行,本产品只能直接加入凝胶中进行染色或电泳后再染色。

Q:为何前端(靠近正极)的DNA 条带很淡或根本看不见?

A:跟EB 一样,电泳时绿如蓝核酸染料朝负极方向移动,当前端的DNA(zui小片段)进入没有绿如蓝核酸染料的区域时,已经结合的染料分子会逐渐从DNA 分子上脱落,所以条带会变淡或根本看不见。解决办法之一是缩短电泳时间或电泳后再染色;之二是在每100 mL 电泳缓冲液中补加3-5μL 染料。

Q:本产品在哪种缓冲液中效果zui好?

A:绿如蓝核酸染料在不同缓冲液中背景荧光强度不同,从弱到强的顺序是:

SuperBuffer-2、TBE、TAE。在背景较强的缓冲液体中,可以适当降低染料的用量,比如100mL 胶中加3-5 μL。zui佳浓度需要稍做摸索。

Q: 为何电泳后前面部分(靠近正极)的胶呈白色,后面的胶呈黑色?

A: 绿如蓝核酸染料带正电,电泳时往上走,胶的黑色部分是染料上移后留下的无染料胶。

本产品在TAE 中背景zui强,可参考上个问题答案更换电泳液以降低背景值。

Q:用SYBR 染色的DNA 在电泳时为何容易发生条带模糊和扭曲现象?

A:SYBR 染料一般与DNA 的小沟结合,但在常规电泳条件下该结合并不牢固,染料分子可以在标记的和未标记的DNA 分子之间转移,使DNA 分子的泳动速度时快(无染料结合时)时慢(有染料结合时),发生条带模糊和扭曲现象。嵌入型染料(如EB和本产品)与DNA 结合牢固,则无此现象。

Q:核酸染料是否都有毒性?

A:核酸染料对动物和人的毒性由多方面决定。

一是染料的膜通透性,EB 被归类为强诱变剂是由于其分子量较小,容易进入细胞内。而EB 二聚体Ethidium Homodimer(EthD)嵌入DNA 的能力比EB 强上千倍,但毒性很小,就是由于其分子比EB大,不能透过细胞膜,所以毒性反而更低。SYBR 系列染料虽然低毒,但由于一般都溶于DMSO(因为容易水解,不能使用水溶液做溶剂)中,所以如果溅到皮肤表面,更容易进入皮肤。

二是染料是否容易被人体降解。比如EB 在体外就很难降解,一旦进入体内能在人体内残留的时间可能比较长,增加了毒性;而SYBR Green I等染料(也能以嵌入方式与DNA 结合)由于不稳定,比较容易自然降解,所以毒性自然较低。

三是降解产物是否有毒性,比如用很多方法(如强碱法)降解EB 得到的产物有的比EB 毒性更大,而有的染料降解产物毒性却低很多,甚至。

四是染料进入细胞核以后是否能跟DNA 结合,很多实验结果显示即使EB 染料也很难嵌入型到染色体中,因为染色体中的DNA 已经紧密地与各种组蛋白结合。

五是细胞修复突变的能力,正常人体都有很强的修复突变的能力,如修复日光中UV 诱导的DNA 突变。总之,一种DNA 染料的毒性强弱是多种因素综合的结果。

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日期: 2019-08-10
标签: 核酸 产品 特点
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