BTN70202 柱式酵母质粒DNA提取试剂盒说明书

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BTN70202 柱式酵母质粒DNA提取试剂盒说明书


产品编号:
BTN70202

规格:50T

产品及特点

本产品是专门用于提取酵母质粒DNA 的产品(不适用于酵母dsRNA 质粒)。本产品根据酵母细胞壁十分坚硬的特点,在细菌质粒碱裂解法的基础上,增加了高效裂解酵母细胞壁的预处理步骤,可在1 小时左右得到可以用于PCR 或转化酵母质粒DNA。

1. 快速,整个过程只需要一个小时左右,可同时处理多个样品。

2. 得到的酵母质粒DNA 纯度高,可直接用于转化和PCR 等实验。

3. 可以从平板上的菌斑或液体培养的酵母中抽提质粒DNA。

4. 安全,不需使用玻璃珠、酚、fang等试剂。

5. 每5-10 mL 酵母培养液一般可以提取到1μg左右的高拷贝酵母质粒DNA。

6. 即开即用,经济实惠,客户自己不需要准备额外的试剂。

规格及成分:

成分

规格

溶液A

30ml

溶液B

13ml

溶液C

13ml

溶液D

18ml

破壁酶

50mg

RNase A溶液10mg/mL)

0.15ml

离心吸附柱

50套

通用洗柱液

50ml

DNA洗脱液2.0

10ml

说明书

1份

保存条件:

常温运输及保存(RNase A 溶液4℃保存),有效期一年。

自备试剂:

无菌水。

使用方法:

1. 将5-10 mL 酵母过夜液体培养物分多次转移到1.5 mL 塑料离心管中。每转移一次后,需要12000-15000×g 室温离心1分钟,然后吸弃液体培养基。注意:不要使用培养时间超过16 小时的酵母液体培养物,否则质粒DNA 产量偏低;也不要使用超过10 mL 的酵母液体培养物,否则破壁不充分,降低质粒DNA 产量。

2. 加入1 mL 自备的无菌水,充分震荡混匀,12000-15000×g 室温离心1分钟,吸弃上清。

3. 加入600 μL 溶液A,充分震荡细胞沉淀重悬,95℃保温10分钟。

4. 12000-15000×g 室温离心1分钟,弃上清液。

5. 加入250 μL 含破壁酶的溶液B (配制方法是将本试剂盒提供的50mg 粉末状的破壁酶和0.15mL RNase A溶液全部加入到装有13 mL溶液B的塑料瓶中,轻柔摇晃混匀后使用。未用完的部分需要分装成小份然后放-20℃保存,否则破壁酶很容易失去活性),吹打混匀。

6. 37℃保温30分钟,延长保温时间到60分钟有利于细胞壁的裂解。注意:放置较长时间后,溶液B 中的裂壁酶会逐渐失活,额外再加入一些裂壁酶(如蜗牛酶、Lyticase、Zymolyase、Lywallzyme 等,总浓度为1 mg/mL)可以极大提高产量。

7. 将离心管放冰浴冷却后,加入250 μL 溶液C,轻轻颠倒混匀直至裂解液变得澄清,然后室温放置5-10分钟。注意:不要剧烈震荡,否则基因组DNA 将断裂并污染质粒DNA。

8. 加入350 μL 溶液D,轻轻颠倒混匀几次,管内将出现白色沉淀物,然后冰浴放置10-30分钟(如果质粒较长,zui好放置30分钟)。

9. 12000-15000×g 室温离心6-10分钟,将上清液转移到离心吸附柱中。

注意:不要将漂浮在液面的沉淀物(如果有的话)转移到离心吸附柱中。上清液可以分多次转移。

10. 室温下放置至少2分钟以让质粒DNA 充分结合到离心吸附柱上。

11.12000-15000×g 室温离心1分钟,弃穿透液。

12. 将 500 μL 通用洗柱液加入离心吸附柱中,12000-15000×g 室温离心1分钟,弃穿透液。

13. 重复上步操作一次。

14.12000-15000×g 室温离心1分钟去除离心吸附柱中残留液体。不要此步省略,否则残留洗液将影响后续的电泳、PCR 和转化实验。

15. 将离心吸附柱套在一干净的1.5 mL 塑料离心管中,加入30-100 μL DNA 洗脱液2.0(加入的量取决于预期的DNA 浓度)至离心吸附柱的膜的中央。

16. 室温下放置至少2分钟。

17.12000-15000×g 室温离心1分钟以洗脱DNA。

18. 如有必要,可以再加入适量DNA 洗脱液2.0洗出残留的DNA。第二次洗脱得到的DNA 的产量约为一次的30-50%。不要将已经洗脱的、含DNA 的溶液再加上去。

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日期: 2019-08-10
标签: 酵母 试剂盒 产品 特点
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