BTN60105 加A试剂盒说明书

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BTN60105 加A试剂盒说明书

产品编号:BTN60105

规格:50T

产品及特点

本产品利用Taq DNA polymerase 的不依赖于模板的末端转移酶活性,在只有dATP 存在的情况下,在平末端的DNA 片段加上一个dA 尾巴,使平末端片段也能被T 载体克隆。

1. 简单,2×Tailing Buffer 中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。

2. 适用于任何平末端的DNA 片段,包括Pfu DNA polymerase 等酶合成的DNA 片段。

3. 产物可以直接用于与T 载体的连接。

格及成分:

成分

规格

Taq DNA polymerase (5U/μL)

50μl

2×Tailing Buffer

1ml

说明书

1份

保存条件:

低温运输-20℃保存,有效期一年。

自备试剂:

PCR 片段、超纯水。

使用方法:

一:反应前纯化处理:

Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo 等具有3 到5 外切活性的DNA 聚合酶扩增得到的DNA片段,必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程(如酚/fang抽提或Proteinase K处理),否则它们将在加A 反应时,切除掉加上的A尾巴,干扰反应。可以采取胶回收和酚/fang抽提法等常规方法纯化,zui后溶解在水或TE 中,终浓度以0.1 μg/μL为宜。

二:加A反应

在干净的0.5 mL 或1.5 mL 离心管中,分别加入下列成分:

回收的DNA片段

0.2-2μg

2×dA Tailing Buffer

25μL

Taq DNA polymerase(5U/μL

1μL

补水到

50μL

72℃保温2小时

 

三:反应后处理

A反应后,Taq DNA polymerase 将与DNA末端紧密结合,所以必须酚/fang抽提去除。如果使用Proteinase K处理后再用酚/fang抽提效果会更好。得到的DNA 溶于适量水和TE 中后即可用于T载体的连接反应。


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日期: 2019-08-16
标签: 试剂盒 产品 特点 运输
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