BTN51210 超快核酸电泳液干粉说明书

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BTN51210 超快核酸电泳液干粉说明书


产品编号:
BTN51210

规格:20L/50L

产品及特点

SuperBuffer-2 是百奥莱博在SuperBuffer 基础上开发的DNA/RNA 两用快速电泳液。它跟SuperBuffer 一样,能以高达30 V/cm 的电压电泳,达到快速电泳的目的。跟SuperBuffer 不同的是,本产品对盐离子浓度敏感度低,同时还能用于RNA 电泳。其主要优点是:

1. 快速,电泳时间短, 对分辨率要求不高的电泳(如PCR 和酶切检测等)甚至可以在5-10 分钟内完成。

2. 不影响后续的Southern 杂交,DNA 胶回收和DNA 连接等反应。

3. 价格与TBE(干粉)相当甚至更便宜。

4. DNA 胶回收率高于使用TAE 和TBE 电泳的胶回收。

规格及成分:

成分

20L

50L

SuperBuffer-2

70g

180g

说明书

1份

1份

保存条件:

常温保存和运输,有效期两年。

自备试剂:

蒸馏水。

使用方法

一:溶液的配制

将本产品全部加到一个干净的容量适当的容器中,按下表的用量加入蒸馏水并在室温下用磁力搅拌器搅拌,直到干粉完全溶解(一般需要30 分钟左右)。

 

20 L干粉

50 L干粉

配法一(配制20X 浓缩液)

加水1 升得到20×浓缩液

加2.5 升得到20×工作液

配法二(直接配制工作液)

加水20 升得到1×工作液

加水50 升得到50×工作液

注:其他浓度的浓缩液配制可以按比例计算,但浓缩液浓度不能超过20×,否则干粉不能全部溶解。由于干粉含多种未彻底混合均匀的成份,所以必须一次性全部用于溶液的配制。如果缓冲液(浓缩液或工作液)长时间不用,zui好灭菌后放4℃长期保存。

: DNA 电泳

SuperBuffer-2 浓缩液用蒸馏水稀释到1×,除了需要使用较高电压才能得到快速的电泳结果外,操作跟使用TAE 和TBE 基本一样。需注意的地方是:

1. 电压:在SuperBuffer-2 溶液中既可以使用常规电压,也可以使用较高电压,只是使用常规电压时,其快速的优越性就体现不出来。使用较高电压时,由于各电泳槽结构不同,zui佳电压需要稍做摸索。一次zui好将工作电压调到zui高电压的80%左右,即平均25 V/cm(电极距离)。对一般minigel,一般可以用250-350V 跑5-10 分钟;对大的电泳槽,可用400-450V 跑5-10 分钟。每次根据电泳结果和缓冲液温度决定各电泳槽的zui佳工作电压和时间。一般电压越高,电泳时间越短。若在电泳时发生电流或电压逐渐下降的现象,请检查电泳仪是否设置了电流上限或功率上限。缓冲液电泳次数超过3 次或缓冲液中有细菌/真菌生长也会出现此现象,需要更换新的缓冲液。

2. 胶浓度:建议将琼脂糖凝胶的浓度控制在0.8%左右,对于长度在100 bp 以下的DNA 片段,可以将琼脂糖凝胶的浓度提高到1.2%左右。由于每次溶胶过程中会丢失水份,所以zui好在溶胶后适当补充水份(可以前后称重),否则胶浓度会逐渐增加,DNA 的移动速度会减低、产热会增加。使用0.8%左右的琼脂糖凝胶的好处是一方面可以节约胶的用量,另一方面可以使DNA的泳动速度更快,同时还能够提高DNA 的回收率。

3. 染色:如果使用EB,zui好把染料加入到融化后的凝胶中(只是EB 的终浓度zui好为0.4 -0.5μg/mL,比使用TAE 和TBE 时稍高),但也可以加入到电泳缓冲液中或/和电泳上样液中。如果使用百奥莱博低毒染料绿如蓝,zui好将染料加入到融化后的凝胶中。如果只有胶中有染料,则长时间电泳后(超过20 分钟),大部分染料在高压下会与DNA 分离,DNA 条带可能会看不见或看起来很淡,此时应该再染色一次。在染色液中加入一定的量的NaCl(终浓度≥0.05 mol/L)能提高染色效果。SuperBuffer-2 与SYBR Green I 也有良好的兼容性,可以结合使用。

4. DNA 条带扭曲:DNA 样品中所含SDS 量过高时(SDS 主要来于上样液), DNA条带将出现扭曲,影响实验效果。建议使用不含SDS 的上样液。

5. 反复使用:1×SuperBuffer-2 电泳液至少可以重复使用2-3 次,如果使用大电泳槽,可以重复使用的次数会更多。

6. TAE 和TBE 胶:已经用TAE 和TBE 电泳液配置好的琼脂糖凝胶可以直接放入1× SuperBuffer-2 电泳液中按上述电泳条件电泳,但有时候会有扭曲现象。

三:RNA 电泳

DNA 电泳一样,必须在使用前用水将SuperBuffer-2 溶液稀释到1×,其使用方法跟DNA 电泳的主要区别是:

1. 电压:RNA 电泳时,zui高使用电压大约只有DNA zui高使用电压的一半左右,所以一般minigel 可以使用150 V 左右的电压。由于各实验室电泳槽规格各异,一次电泳时,zui好将工作电压调到跟MOPS 电泳一样的电压,每次再逐渐往上调电压和时间,根据电泳结果和测定缓冲液的温度决定今后的工作电压。

2. RNA 上样液:RNA 必须与含变性剂的RNA 上样液混合,并在80℃保温10 分钟后冰浴2-5 分钟再上样。不能直接将RNA 样品上样或使用DNA 上样液,否则电泳不但很难得到清晰的条带,并且在加样孔中还会有看似DNA 污染的条带出现。推荐使用百奥莱博生产的RNA 变性/上样/染色三合一即用型溶液RNAON。

3. 胶浓度:RNA 电泳zui好使用1%-1.5%的琼脂糖凝胶,用1X SuperBuffer-2配制。

4. 染色:同DNA 电泳。



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日期: 2019-08-16
标签: 核酸 产品 特点 离子
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