BTN51206 Taq DNA聚合酶说明书

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BTN51206 Taq DNA聚合说明书

产品编号:BTN51206

规格:5000U

产品及特点:

本产品是Thermus aquaticus(水生栖热菌)的DNA聚合酶基因在E. coli中表达而得,具有以双链DNA为模板的5'→3'聚合酶活性和5'→3'外切酶活性。Taq DNA聚合酶长为832个氨基酸,分子量为 94 Kd。该酶可以广泛用于PCR,RT-PCR,加尾反应等。

1.耐热DNA聚合活性,该酶在90℃以上几乎无DNA合成,在75~80℃时延伸率约150个核苷酸,70℃时为60个核苷酸/秒,55℃时为24个核苷酸/秒。在65~68℃并有Mn2+存在时还具有逆转录活性。

2.热稳定,在PCR混合物中95℃保温40 分钟仍可保持50%的活性。

3.Mg2+离子依赖性,MgCl2浓度在2.0 mM时该酶催化活性zui高。

4.本酶无3'→5'外切活性,不具3'→5'校对功能,碱基错配机率为2.1×10-4

规格及成分:

成分

规格

Taq DNA聚合酶 (5U/μL)

20μl

10×PCR Buffer(含Mg2+)

1ml

MgCl2,25mM

1ml

说明书

1份

保存条件:

低温运输,-20℃保存,有效期一年。

使用方法

λ DNA为模板进行PCR扩增反应为例

1.按下列组份配制PCR反应液。

Taq DNA聚合酶(5U/μl)

0.25μl

10×PCR Buffer(含Mg2+)

5μl

MgCl2(25mM)

根据需要补加

自备dNTP(各2.5mM)

4μl

模板DNA

见下

引物1(20μM

1μl

引物2(20μM

1μl

灭菌蒸馏水

Up to 50μl

注:10×PCR Buffer 含15 mM MgCl2(在PCR体系中的终浓度为1.5 mM),是否需要补加MgCl2根据实验决定。但一般不需要补加。

推荐50μL PCR反应体系中模板DNA推荐使用量

哺乳动物基因组DNA

0.5-1μg

酵母基因组DNA

5-500ng

细菌基因组DNA

0.5-50ng

质粒DNA

5-500pg

PCR回收片段

1-100pg

2.PCR反应条件

λDNA为模板,扩增1 kbp的DNA片段的PCR反应条件如下: 

注:PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定zui佳的反应条件(温度、时间等)。

注意事项:

PCR的反应液请在冰中配制,然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法(Cool Start Method)可增强PCR扩增的特异性,减少PCR过程中的非特异性反应,能得到良好的PCR结果。

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日期: 2019-08-16
标签: Taq DNA 聚合 聚合酶 说明书
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