BTN51101 常态转化液说明书

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BTN51101 常态转化液说明书

产品编号:BTN51101

规格:20T

产品及特点

常态转化液能使各种常态的E.coli 细胞直接用于快速转化实验,使广大用户不再因为简单的转化实验而再为感受态细胞的制备,保存和运输等繁琐的事情而操心,大大地缩短了基因克隆实验的时间,提高使用者的工作效率。

1. 不需专门制备感受态细胞,直接使用常态的细胞进行质粒转化,随用随配,十分方便。

2. 常态细胞包括新鲜培养的菌液,新鲜的或4℃放置数月的培养基菌落,甘油菌种保存液等。

3. 适用菌种和质粒广泛,用过的E.coli 菌种包括K12 系的DH5a 和Tg1, B 系的BL21(DE3)。用过的质粒有pGEM, pET 和克必隆系列等。

4. 转化效率适中,使用10ng 质粒转化一般能得到上万个转化子)效率在10E5 到10E6 CFU/ug 质粒之间),使用3-5μL 连接液转化一般能得几千个转化子,足够筛选重组子使用(但不适合构建文库)。

5. 单管快速操作,整个操作可以在一个1.5 mL 塑料离心管中进行, zui短可以在三十分钟内完成, 不需要过夜细菌培养,热休克处理甚至恒温摇床,极其适用于自动化的大规模克隆筛选工作。

6. 稳定性好,本可以在-20℃条件下长期保存而不用担心转化效率的降低,而感受态细胞在同样条件下会迅速失去活性。

格及成分:

成分

规格

常态转化液

1ml

阳性对照(pGEM3 或pUC19)10μL,1ng/μL

5T

说明书

1份

保存条件:

低温运输,-20℃保存,有效期一年。

自备试剂:

液体培养基本(LB或SOC),抗菌素。

使用方法:

1. 标记无菌的1.5 mL塑料离心管并加入1 mL 液体培养基(如SOC或LB),每次转化试验zui好加上阳性对照(用提供的pGEM3或其他质粒)和阴性对照(不加DNA)各一个。

2. 如果使用E.coli菌落,则直接用接种环,无菌牙签或无菌吸头从培养皿上挑取1-5个菌落(直径在3-5 mm之间)到每个离心管中,用移液枪轻柔吹打散开。如果使用甘油菌种保存液,则直接取50-100 μL菌种液到1 mL培养液中。如果使用单个菌落培养得到的新鲜培养液,则取1 mL培养了3-4小时的菌液直接从第4步开始。

3. 37℃保温1小时(如果保温时间延长到3-4小时,可以提高转化效率一倍,但过长则转化效率又开始降低)。

4. 室温10000 rpm离心1分钟后小心移弃上清(液体培养基),离心速度低于10000rpm则细菌沉淀易丢失。沉淀的细菌约芝麻或麦片大小为宜。细胞过多或过少都不好。

5. 短暂离心,用移液枪小心将残留的培养液(约50 μL)吸出,否则残留培养基将会严重影响转化效率,故此步不能省略。

6. 加入50 μL 冰浴的克必隆转化液并小心将细胞吹打均匀。

7. 加DNA样品。在样品管中加入1-5 μL连接反应液并轻柔吹打均匀;在阳性对照管中加入5 ng阳性质粒(没被酶切的载体,也可以使用常用的pGEM, pUC, pBR322等质粒);在阴性对照管中加入连接反应的阴性对照,如果没有则不加入任何溶液或加入1-5 μL无菌水。

8. 将上述离心管置于-20℃直到液体凝固为止(一般需要20分钟到1小时),然后冰浴放置5-10分钟。

9. 在每个离心管中加入1 mL无抗菌素的SOC或LB培养液,混匀后置37℃水浴保温1小时以便让抗性基因表达,否则将没有转化子生长。

10. 将溶液充分吹打混匀后分别取30-200 μL分别涂于含相关的抗菌素的培养盘上,剩余溶液zui好留4℃待用。

11. 37℃ 16-24小时培养,阴性对照盘上不应有任何落菌,否则可以判断操作中有污染或培养基中抗菌素浓度不够。使用质粒转化的阳性对照100 μL涂盘一般能有上千个菌落。连接样品转化所得菌落数将取决于连接反应效率等多种因素,100 μL的涂盘一般有几十到几百个转化子。

使用效果:

10 ng克必隆G 载体转化10个E.coli Tg1菌落后得到的转化子。用3μL连接液(克必隆B载体+1 Kb DNA片段,10μL反应体系)转化10个E.coli DE3菌落后37℃过夜保温得到的转化子。涂盘量均为200μL。

 
 
 
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日期: 2019-08-16
标签: 产品 特点 感受态细胞 运输
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