BTN50901 菌落PCR试剂盒2.0说明书

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BTN50901 菌落PCR试剂盒2.0说明书

产品编号:BTN50901

规格:50T

产品及特点

菌落PCR 是筛选重组子的有效方法,可以使质粒鉴定过程从两天缩短到几小时。但由于它直接以E.coli 菌落为PCR 而菌落中常常含有未进入细菌的、来源于连接反应的载体DNA 和插入片段,所以十分容易产生假阳性。本产品针对此缺点进行了改良,具有下列特点:

1. 无假阳性率,特殊的溶菌方式能有效降低菌落中未转化DNA 对PCR的干扰,使假阳性率低于5%,远低于绝大部分同类产品。

2. 简单快速,用户只需要提供PCR 引物和E.coli 菌落,不需要细菌培养和质粒提取,整个筛选过程从一天缩短到2-3 小时,节约时间和成本。本产品与常用E.coli 菌株和载体兼容。既可小规模筛选,也适用于大规模筛查。

3. 高灵敏度,既可用于高拷贝质粒,也适合于低拷贝质粒。

4. PCR 反应体系中含有惰性电泳染料,反映完成后可直接上样电泳,不需另加上样液。

5. 处理过的菌落样品低温长期保存后仍能用于PCR 筛查。

6. 性价比高,价格跟质粒提取试剂盒相当,但节约一天时间。

格及成分:

成分

规格

溶菌液A

0.5ml

溶菌液B

0.1ml

PCR 2.0

0.75ml

说明书

1份

保存条件:

低温运输,-20℃保存,有效期一年。

使用方法:

1. 标记1.5 mL 塑料离心管,除样品管外,还必须加上阳性和阴性对照管。

在每个管中加入下列成份配制100 μL 溶菌液:

H2O(自备)

88μl

溶菌液A

10μl

溶菌液B

2μl

合计

100μl

2. 用无菌牙签或无菌移液枪头从培养皿上挑取一个菌落或部分菌落,放入溶菌液中,充分震荡直到菌落彻底分散混匀。为方便回查,zui好在培养皿上给已取样的菌落做好标记。

3. 重复第2 步直到待筛查菌落全部转移到相应的离心管中。

4. 在阳性对照管中,加入已知含有待筛选质粒的菌落;如果没有此菌落,直接进入第6 步,用连接反应液直接作PCR 的阳性对照。

5. 在阴性对照管中,加入已知的不含有待筛选质粒的任何E.coli 菌落(如常见的宿主细菌),其他处理同第2 步。

6. 将所有离心管置于37℃保温30 分钟,然后转入100℃水浴处理10分钟。振荡混匀溶液数秒后10,000 g 离心1 分钟,转移上清到一新的离心管中待用。此溶液为样品DNA 溶液。

7. 标记与第1 步数量相同的PCR 管,每个管中分别加入下列成份并充分混匀:

样品DNA溶液

1-5μl

PCR MagicMix

15μl

引物1(10 pmol/μL)

1μl(自备)

引物2(10 pmol/μL)

1μl(自备)

Taq 物DNA聚合酶(5U/μL)

0.2-0.4μL(1-2U)

补水到

30μl

注意:引物选择有三种情况,一是选用商品化的能与多克隆位点两边顺序结合的通用引物(如T7、T3、SP6 等);二是使用用户自己合成的能与插入片段结合的引物(如果插入片段是PCR 产物,引物是现成的);三是组合一种情况和第二种情况的引物。选择前两种引物在筛查到重组子后还必须用其他方法(如质粒制备后酶切或使用载体引物/插入片段引物PCR)进一步确定插入方向。选择第三种引物则可以同时完成重组子筛选和DNA 插入方向确定两项工作。用户可以根据自己的具体情况选择。

8. 将PCR 管放入PCR 仪器中进行扩增,PCR 温度参数根据引物和模板情况由客户自己预先确定。

9. PCR 结束后取10 μL 电泳直接进行琼脂糖电泳分析(注:本试剂盒提供的PCR buffer 中已经含有电泳染料和甘油,故可以直接上样。)

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日期: 2019-08-16
标签: PCR 试剂盒 产品 特点
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