KFS127 高尔基体绿色荧光探针说明书

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高尔基体绿色荧光探针 GolgiGreen

Cat number:KFS127

Store at -20℃,避光,12 months

For Research Use only
 

一、 产品描述 

 高尔基体绿色荧光探针 GolgiGreen(NBD C6-神经酰胺)可以用来研究神经鞘脂类的运输代谢机制,也可以用来作为活细胞或固定细胞内高尔基体的选择性染料。
       NBD 染料对于环境敏感,在水中荧光信号微弱,但是在非质子溶剂和非极性环境中荧光增强,Ex/Em=466/536nm。
 

二、 产品组分

组份

KFS127

储存条件

高尔基体绿色荧光探针 GolgiGreen

1mg/mL in 氯fang乙醇溶液; 200 μg

-20℃,避光

备注:C6-NBD-CERAMIDE,分子式:C30H49N5O6 分子量:575.74。

 

三、 操作说明

   NBD C6-神经酰胺-BSA 复合物制备

   活细胞和固定细胞染色,建议使用以 BSA 复合物形式存在的 NBD C6-神经酰胺。制备方法如下:

     1.1 (本试剂盒已提供)NBD C6-神经酰胺溶液,溶剂为氯fang:乙醇(体积比=19:1)。

     1.2 吸取 50μL  NBD C6-神经酰胺储液至小玻璃试管中,保持干燥,通入氮气流后,保持在真空放置至少1小时。再以 200μL 的无水乙醇重溶。

     1.3 称取 10mL 无血清的平衡盐溶液如,Hank’s +10mM HEPES,pH7.4(HBSS/HEPES)到 50mL 塑料离心管中,加入 3.4mg(使之浓度为 0.34mg/mL)的脱脂 BSA。

     1.4 涡旋混匀含有 10mL  BSA 溶液的试管,注入 200μL  NBD C6-神经酰胺乙醇溶液。涡旋震荡。
      所得到的的溶液(5 µM NBD C6-ceramide + 5 µM BSA)可以于-20 度保存。

 

   活细胞高尔基复合体染色

     2.1 用合适的缓冲液如 HBSS/HEPES 冲洗盖玻片上的细胞。

     2.2 5 µM NBD C6-ceramide + 5 µM BSA 孵育细胞,4 度,30 分钟。

    2.3 预冷的新鲜培养基多次冲洗样品细胞,在放于 37 度另外孵育 30 分钟。

    2.4 新鲜培养基洗涤样品,用荧光显微镜观察。

 

   固定细胞的高尔基复合体染色

   染色条件同上一致,但洗涤剂和含甲醇/丙酮类的固定剂必须加以避免。

     3.1 HBSS/HEPES 冲洗盖玻片上生长的细胞,用 0.5%戊二醛/10%的蔗糖/100mM 的 PIPES,pH7.0 或者2~4%多聚甲醛/PBS 室温固定 5~10 分钟。

     3.2 以预冷HBSS/HEPES 多次洗涤样本,5μM NBD C6-神经酰胺-BSA复合物在4度下冰浴孵育30分钟。

    3.3 HBSS/HEPES冲洗,10% FBS或2mg/mL的BSA在室温下孵育30~90分钟,以提高高尔基体染色。

     3.4 样品洗净,装入并通过荧光显微镜观察。

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标签: 荧光 产品 运输 代谢 环境
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