高尔基体红色荧光探针 GolgiRed
Cat number：KFS126
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For Research Use only

一、 产品描述

高尔基体红色荧光探针 GolgiRed（BTR C5-神经酰胺）可以用来研究神经鞘脂类的运输和代谢机制，也可以用来作为活细胞或固定细胞内高尔基体的选择性染料。
       NBD 染料对于环境敏感，在水中荧光信号微弱，但是在非质子溶剂和非极性环境中荧光增强，Ex/Em=589nm/617nm。

备注：BTR C5-神经酰胺，分子量：705.71

三、 操作说明

BTR C5-神经酰胺-BSA 复合物制备

活细胞和固定细胞染色，建议使用以 BSA 复合物形式存在的 BTR C5-神经酰胺。制备方法如下：

   1.1 制备 1mL 含 BTR C5-神经酰胺溶液，溶剂为氯fang：乙醇（体积比=19:1）。

   1.2 吸取 50μL 的 BTR C5-神经酰胺储液至小玻璃试管中，保持干燥，通入氮气流后，保持在真空放置至少1小时。再以 200μL 的无水乙醇重溶。

   1.3 称取 10mL 无血清的平衡盐溶液，如 Hank’s 液+10mM HEPES，pH7.4（HBSS/HEPES）到 50mL 塑料离心管中，加入 3.4mg（使之浓度为 0.34mg/mL）的脱脂 BSA。

   1.4 涡旋混匀含有 10mL 的 BSA 溶液的试管，注入 200μL 的 BTR C5-神经酰胺乙醇溶液。涡旋震荡。所得到的的溶液（5 µM C5-ceramide + 5 µM BSA）可以于-20 度保存。

活细胞高尔基复合体染色

   2.1  用合适的缓冲液如 HBSS/HEPES 冲洗盖玻片上的细胞。

   2.2  5µM BTR C5-ceramide + 5 µM BSA 孵育细胞，4 度，30 分钟。

   2.3  预冷的新鲜培养基多次冲洗样品细胞，在放于 37 度另外孵育 30 分钟。

   2.4  新鲜培养基洗涤样品，用荧光显微镜观察。

固定细胞的高尔基复合体染色

染色条件同上一致，但洗涤剂和含甲醇/丙酮类的固定剂必须加以避免。

   3.1 HBSS/HEPES 冲洗盖玻片上生长的细胞，用 0.5%戊二醛/10%的蔗糖/100mM 的 PIPES，pH7.0 或者2~4%多聚甲醛/PBS 室温固定 5~10分钟。

   3.2 用预冷HBSS/HEPES多次洗涤样本，5μM BTR C5-神经酰胺-BSA复合物在 4度下冰浴孵育30分钟。

  3.3 HBSS/HEPES 冲洗，以10% FBS或者 2mg/mLBSA室温下孵育30~90分钟，以提高高尔基体染色。

   3.4 样品洗净，装入并通过荧光显微镜观察。