一、色谱柱的平衡：
高效液相色谱仪反相色谱柱是保存在乙腈中，新柱应先用10～20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱，一定确保分析样品所使用的流动相与乙腈－水互溶。每天用足够的时间以流动相平衡色谱柱，会在处理问题方面获得的“补偿”，而且色谱柱的寿命会变得更长。
平衡操作步骤：
1、平衡开始时，将流速缓慢提高，用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线。缓冲盐或离子对试剂流速如果较低，需要较长时间来平衡。
2、如果使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水“过渡”。即每天分析开始前，必须先用纯水冲洗30min以上，再用缓冲盐流动相平衡。分析结束后，必须先用纯水冲洗30min以上，除去缓冲盐之后，再用甲醇冲洗30min保护色谱柱。
二、色谱柱的再生：
1、建议用来冲洗色谱柱的溶剂体积：
（1）Ф4×125mm色谱柱：
柱体积为1.6mL，所用溶剂体积为30mL。
（2）Ф4×250mm色谱柱：
柱体积为3.2mL，所用溶剂体积为60mL。
（3）Ф10×250mm色谱柱：
柱体积为20mL，所用溶剂体积为400mL。
2、再生方法：
（1）极性固定相的再生：
正庚烷，乙酸乙酯，丙酮，乙醇，水。
（2）非极性固定相的再生：
水，异丙醇，乙腈，水。
3、注意事项：
（1）在对用NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能以铵根离子形式存在，因此应在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后用水冲洗至碱溶液完全流出。
（2）如果用有机溶剂－水不能完全洗去硅胶表面吸附的杂质，在水洗后加用0.05M的稀硫酸冲洗非常有效。
三、色谱柱的维护：
1、使用预柱、保护柱和分析柱。硅胶在极性流动相和离子性流动相中有一定的溶解度。
2、大多数反相色谱柱的pH值稳定范围是2～7.5，尽量不超过该色谱柱的pH值范围。
3、避免流动相组成和极性的剧烈变化。
4、流动相使用前必须经脱气和过滤处理。
5、如果使用极性或离子性缓冲溶液作流动相，应在实验完毕后冲洗干净色谱柱，并保存于甲醇或乙腈中。
6、氯化物溶剂对色谱柱有一定腐蚀，柱和连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀。
