高效液固色谱仪是利用样品各组分在固定相和流动相中吸附－解吸作用的差异，使各组分在作相对运动的两相中反复多次受到吸附－解吸作用而达到相互分离。

　　一、可用于相对分子质量中等的油溶性样品的分离。

　　二、对具有官能团的化合物、结构异构体和几何异构体有较高选择性，但对同系物的分离能力较差。

　　在食品分析中，无论是残留分析还是成分分析，HPLC 也已成为不可或缺的。流动相脱气是HPLC 系统能得到可靠数据的一个很有效的措施。下面分析一下，高效液相色谱脱气的必要性，并总结归纳了脱气常用的方法。

　　一、脱气的必要性

　　高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。

　　1、液固色谱法

　　高效气相色谱仪的分流进样是先将较大体积的样品注入到高效气相色谱仪气化室中，样品气化后和载气均匀混合，通过分流器，样品被分流成流量相差悬殊的两部分，其中流量较小的部分进入毛细管柱，流量较大的部分放空。衬管的选择方法如下：

　　高效液相色谱仪高压输液系统由贮液器、高压输液泵、过滤器、脱气装置和梯度洗脱装置等组成。

　　一、贮液器：

　　贮液器用来提供足够数量的符合要求的流动相，以完成分析工作。所有溶剂在放入贮液罐前必须经过0.45um滤膜过滤，除去溶剂中的机械杂质，以防输液管道和进样阀产生阻塞现象。

　　高效气相色谱仪分析中，如果怀疑进样器或载气被污染，判断方法如下：

　　一、高效气相色谱仪在40～50℃保持8h或以上。

　　二、运行一个空白分析（开启GC但不进样）。

　　三、收集空白分析的色谱图。

　　四、个空白分析完成以后立即开始第二次，二者间隔时间不要超过5min。

　　高效气液分配色谱仪固定液有聚乙二醇类、腈类、酯类、硅油类、烃类和特殊固定液等。

　　一、聚乙二醇类：

　　1、固定液举例：PEG－20M和FFAP。

　　2、极性：强极性。

　　3、应用：适合分离强极性样品。

　　二、腈类：

　　1、固定液举例：β，β′－氧二丙腈。

　　高效毛细管柱气相色谱仪常用固定液有聚二甲基硅氧烷、聚乙二醇、含苯基的聚二甲基硅氧烷、含氰基的聚甲基硅氧烷和含三氟丙基的聚甲基硅氧烷等六种。

　　一、聚二甲基硅氧烷：

　　高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（输送压力可达4、9~107Pa）；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。

　　特点

　　高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。与经典的液相色谱相比，具有高效液相所用的固定相粒度小（5um-10um）、传质快、柱效高的优势。近年来，在保健食品功效成分、营养强化剂、维生素类、蛋白质的分离测定等应用广泛。世界上约有80％的有机化合物可以用HPLC来分析测定。

　　1、反相柱

　　分别用甲醇：水=90：10、纯甲醇、二氯甲烷等溶剂着流动相，依次冲洗，每种流动相流经色谱柱不少于20倍的色谱柱体积。然后再以相反的次序冲洗。

　　①溶剂中的不溶物

　　②样品中的不溶物

　　高效液相色谱仪色谱柱性能的评价包括评价内容和评价方法等方面。

　　一、评价内容：

　　1、分离效能。

　　2、对指定溶质的选择性。

　　3、在不同PH值介质中的稳定性。

　　4、不同批次但同型号填料间性能的重现性。

　　5、适宜的操作压力等。

　　高效气相色谱仪分流进样中的分流歧视是指高效气相色谱仪分流进样分析中，在一定分流比条件下，不同样品组分的实际分流比不同，造成进入色谱柱的样品组成与原样品组成不同，从而影响定量分析准确度。造成分流歧视的原因如下：

　　一、不均匀气化：

　　高效液相色谱仪是实验中常见的仪器之一，色谱柱的灵敏度是确保实验准确性的重要原因，那么当色谱柱的灵敏度不够时，我们该如何去解决呢？应该从以下几个方面去分析：

　　1、样品量不足：解决办法为增加样品量

　　2、样品未从柱子中流出：可根据样品的化学性质改变流动相或柱子

　　高效毛细管电泳色谱仪（CE）是以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，利用带电粒子之间的电泳淌度差异和分配系数差异进行分离。电泳基本概念包括电泳现象、电泳技术、电泳速度和电泳淌度等。

　　一、电泳现象：

　　高效气相色谱仪分流进样的操作参数有进样口温度、分流比、载气流速、进样量、进样速度和柱温等。

　　一、进样口温度：

　　高效液相色谱系统主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。

　　高效液相色谱柱常见故障排除方法：

　　一、样品预处理的重要性：

　　1、样品预处理所用时间远大于色谱分离时间。

　　2、消耗大量的溶剂和其它化学品，占分析消耗总成本。

　　操作步骤：

　　1、打开电脑

　　2、打开主机、预热

　　高效毛细管电泳色谱仪（HPCE）是以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，利用荷电粒子之间的淌度和分配系数的差异进行分离，具有三高二少的特点。

　　一、高灵敏度：

　　紫外检测器的检测下限可达10ˉ1～10ˉ15mol，激光诱导荧光检测器可达10ˉ19～10ˉ21mol。

　　二、高分辨率：

　　高效气相色谱仪的分流进样是先将较大体积的样品注入到高效气相色谱仪气化室中，样品气化后和载气均匀混合，通过分流器，样品被分流成流量相差悬殊的两部分，其中流量较小的部分进入毛细管柱，流量较大的部分放空。

　　一、载气流路：

　　液相色谱仪在高效使用中需注意以下几个问题：

　　1、色谱柱中的流动相是否会会排干的问题：

　　高效气相色谱仪分流进样中的分流歧视是指高效气相色谱仪分流进样分析中，在一定分流比条件下，不同样品组分的实际分流比不同，造成进入色谱柱的样品组成与原样品组成不同，从而影响定量分析准确度。消除分流歧视的措施如下：

　　一、尽量使样品快速气化：

　　高效气相色谱仪分析中出怪峰指高效气相色谱仪分析中所出的峰与样品成分不符，出现不应有的怪峰。出怪峰问题分析和解决方案如下：

　　一、溶剂中是否混入杂质。

　　二、注射器或放置样品的容器是否被污染。

　　三、隔膜清洗流量是否正常。

　　四、载气是否被污染，气体过滤器是否保养过。