介绍免疫印迹技术和免疫斑点技术

   日期:2019-05-13     来源:食品伙伴网    浏览:1    
核心提示:免疫印迹技术又称Western印迹法,它将凝胶电泳与固相免疫结合,首先通过蛋白质电泳技术将需要区分的蛋白质转移至固相载体如NC膜等上,再借助酶免疫、放射免疫等技术进行测定。
  免疫印迹技术又称Western印迹法,它将凝胶电泳与固相免疫结合,首先通过蛋白质电泳技术将需要区分的蛋白质转移至固相载体如NC膜等上,再借助酶免疫、放射免疫等技术进行测定。该法能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子质量,常用于检测多种病毒抗体或抗原。

  免疫印迹技术又称Western印迹法,它将凝胶电泳与固相免疫结合,首先通过蛋白质电泳技术将需要区分的蛋白质转移至固相载体如NC膜等上,再借助酶免疫、放射免疫等技术进行测定。该法能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子质量,常用于检测多种病毒抗体或抗原。

  免疫斑点试验(dotimmunobindingassay,DIBA)是利用硝酸纤维素膜(NC膜)或乙酸纤维素膜作为固相支持物,进行抗原—抗体反应的免疫学检测方法。该法具有微量、快速、经济、方便等特点,可用于检测抗体或抗原。

  免疫斑点技术的原理是硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜具有很强的静电吸附力,在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子,因而将抗原吸附于纤维素膜后,就可利用纤维素膜作为固相载体进行抗原—抗体反应。当加入抗体后(即可与膜上的抗原结合,然后再加入带有标记物的抗体,使标记通过抗抗体和相应抗体的结合间接地交联于纤维素膜上。加入标记物相应的底物后,标记物即可与底物作用形成不溶性产物,呈现斑点状着色,从而判定结果。

  根据所用的标记物不同,可分为辣根过氧化物酶免疫斑点试验(使用辣根过氧化物酶作为抗抗体的标记物)、碱性磷酸酶免疫斑点试验(使用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶复合物作为酶标记物)和金银染色免疫斑点试验(使用胶体金作为抗抗体的标记物)等。其中,最常用的是以辣根过氧化物酶标记系统为基础的免疫斑点试验。
 
日期: 2019-05-13
标签: 免疫 免疫印迹 技术 印迹法 凝胶 凝胶电泳
 
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