4.安全提醒
(1)多数化学试剂、药品对人体都具有危害性，在实验操作前，实验者应戴一次性手套，避免用手直接接触。
(2)所有的药品、试剂都应贴有明显的标签，标明药品名称、质量规格及来货日期，必要时用明显标志标明药品、试剂危险性质。
(3)甲醇具有高挥发性，为神经毒物，可经呼吸道、皮肤、消化道进入体内，对视神经及多个脏器造成伤害；异丙醇易燃易爆炸；乙酸乙酯易燃、具刺激性、具致敏性。上述试剂应由专门的实验室保管员来管理，严格记录使用人、用量。操作过程中产生的废液以及上机检测后的样液由实验室回收后交由专门的环保部门处理，严禁倒入下水道。
(4)提前打开通风设施的开关，实验区域通风20min后，人员方可进入。
(5)提取、净化、定容步骤涉及有害或有刺激性气体发生试剂的使用，应在通风柜内进行，不可将头伸入通风橱内。
5.操作步骤
(1)提取称取肌肉、肝脏或肾脏试样10g(精确到0.01g)，用20mL 0.1mol/L高氯酸溶液匀浆，置于磨口玻璃离心管中；然后置于超声波清洗器中超声20min，取出置于80℃水浴中加热30min，取出冷却后离心(4500r/min)15min。倾出上清液，沉淀用5mL 0.1mol/L高氯酸溶液洗涤，再离心，将两次的上清液合并，用1mol/L氢氧化钠溶液调pH至9.5±0.1，若有沉淀产生，再离心(4500r/min)10min，将上清液转移至磨口玻璃离心管中，加入8g氯化钠，混匀。加入25mL异丙醇+乙酸乙酯(40+60)，置于振荡器上振荡提取20min。提取完毕，放置5min(若有乳化层稍离心一下)。用吸管小心将上层有机相移至旋转蒸发瓶中，用20mL异丙醇+乙酸乙酯(40+60)再重复萃取一次，合并有机相，于60℃在旋转蒸发器上浓缩近干。用1mL 0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液(pH6.0)充分溶解残留物，经针筒式微孔过滤膜过滤，洗涤三次后完全转移至5mL玻璃离心管中，并用0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液(pH6.0)定容至刻度。
(2)净化依次用10mL乙醇、3mL水、3mL 0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液(pH=6.0)、3mL水冲洗弱阳离子交换柱，取(1)中适量的提取液至弱阳离子交换柱上，弃去流出液，分别用4mL水和4mL乙醇冲洗柱子，弃去流出液，用6mL乙醇+浓氨水(98+2)冲洗柱子，收集流出液，将流出液在N2-蒸发器上浓缩至干。
(3)试样测定前的准备于净化、吹干的试样残渣中加入100～500uL流动相，在旋涡式混合器上充分振摇，使残渣溶解，液体浑浊时用0.45um的针筒式微孔过滤膜过滤，上清液待进行液相色谱测定。
(4)测定
①液相色谱测定参考条件：
色谱柱：BDS或ODS柱，250mm×4.6mm，5um；流动相：甲醇+水(45+55)；流速：1mL/min；进样量：20～50uL；柱箱温度：25℃；紫外检测器：244nm。
②进样测定：吸取20～50uL标准校正溶液及试样液注入液相色谱仪，以保留时间定性，用外标法单点或多点校准法定量。
③克伦特罗标准(100ug/L)的高效液相色谱图：见图6-6。
图6-6克伦特罗标准(100μg/L)的高效液相色谱图
6.结果计算
式中X——试样中克伦特罗的含量，ug/kg或ug/L
m1——试样色谱峰与标准色谱峰的峰面积比值对应的克伦特罗的质量，ng
f——试样稀释倍数
m2——试样的取样量，g或mL
计算结果表示到小数点后两位。
7.要点提示
(1)理想的高效液相色谱用水应为18.2Ω的超纯水，并通过0.22um的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及CO2等。可购买合格的纯净水，过超纯水机。
(2)克伦特罗的标准物质以盐酸盐的形式存在，配制克伦特罗标准溶液时，要进行相应的转化，计算出所需称量的标准物质的质量。
(3)BDS或ODS色谱柱属于反相柱，柱管内充满有机溶剂，检测样品前，应用10倍柱体积的流动相冲洗色谱柱；检测完毕后，要用甲醇或乙腈将柱管内的流动相置换出来，使其保存在有机相中。
(4)LC-WCX是一种在硅胶填料上键合上羧酸官能团的弱阳离子交换柱，羧基的pH为4.8，当调节pH到2个单位时，它保持带负电，能够结合此pH下带电荷的阳离子；当硅胶表面的羧基被中和(pH比4.8小2个单位)，结合的阳离子被洗脱。
文章来源：《食品理化检测技术》
