对食品中黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的测定，GB/T5009.23-2006中规定了用薄层色谱法、微柱筛选法和高效液相色谱法三种方法。在此介绍微柱筛选法和高效液相色谱法。

1.微柱筛选法测定(依据GB/T5009.23-2006中的第二法)

(1)原理试样提取液通过由氧化铝与硅镁吸附剂组成的微柱层析管，杂质被氧化铝吸附，黄曲霉毒素被硅镁吸附剂吸附，在365nm紫外线下呈蓝紫色荧光，其荧光强度在一定范围内与黄曲霉毒素的含量成正比，由于微柱不能分离B₁、B₂、G₁、G₂，故结果为黄曲霉毒素的总量。

(2)要点提示

①本法适用于各种食品中黄曲霉毒素B₁、黄曲霉毒素B₂、黄曲霉毒素G₁、黄曲霉毒素G₂测定。

②最低检出量黄曲霉毒素B₁、黄曲霉毒素G₁为0.004ug/kg，黄曲霉毒素B₂、黄曲霉毒素G₂为0.002u8/kg；最低检出浓度为黄曲霉毒素B₁、黄曲霉毒素G₁为5ug/kg，黄曲霉毒素B₂、黄曲霉毒素G₂为2.5ug/kg。

2.高效液相色谱法测定(依据GB/T5009.23-2006中的第三法)

(1)原理试样经乙腈-水提取，提取液过滤后，经装有反相离子交换吸附剂的多功能净化柱，去除脂肪、蛋白质、色素及碳水化合物等干扰物质，净化液中的黄曲霉毒素经三氟乙酸衍生，用带有荧光检测器的液相色谱系统分析，外标法定量。按下式计算：

式中X——试样中每种黄曲霉毒素的含量，ug/kg

p——试样按照外标法在标准曲线中对应的浓度，ug/L

V——试样提取过程中提取液的体积，mL

m——试样的取样量，g

f——试样溶液衍生后较衍生前的浓缩倍数

(2)液相色谱条件

色谱柱：12.5cm×2.1mm，5um，C₁₈；柱温：30℃；流动相：乙腈(色谱纯)，水，梯度洗脱变化参照表6-4。调整洗脱梯度，使4种黄曲霉毒素的保留时间在4～25min；流速：0.5mL/min；进样量：25uL；荧光检测器：激发波长(Ex)：360nm；发射波长(Em)：440nm；增益倍数：16。

表6-4 流动相的梯度变化

(3)要点提示

①该法适用于大米、玉米、花生、杏仁、核桃、松子等食品中黄曲霉毒素B₁、黄曲霉毒素B₂、黄曲霉毒素G₁、黄曲霉毒素G₂的测定。检出限：黄曲霉毒素B₁、黄曲霉毒素G₁为0.50ug/L，黄曲霉毒素B₂、黄曲霉毒素G2为0.125ug/L。

②使用氮气吹干时，注意控制氮气流速，防止液体鼓泡、飞溅，以免造成含毒素液体污染实验环境和导致回收率偏低。

③功能净化柱在使用时尽量以稳定的速度下压，控制在10min左右完成5～7mL样液的收集。

④C₁₈色谱柱属于反相柱，柱管内充满有机溶剂，检测样品前，应用10倍柱体积的流动相冲洗色谱柱；检测完毕后，要用甲醇或乙腈将柱管内的流动相置换出来，使其保存在有机相中。

文章来源：《食品理化检测技术》