本实训采用滴定法(EDTA法)(依据GB/T5009.92-2003)。

1.目的要求

掌握EDTA滴定法测定食品中钙含量的原理和方法。

2.实训原理

钙与氨羧络合剂能定量地形成金属络合物，其稳定性较钙与指示剂所形成的络合物为强。在适当的pH范围内，以氨羧络合剂EDTA滴定，在达到当量点时，EDTA就从指示剂络合物中夺取钙离子，使溶液呈现游离指示剂的颜色(终点)。根据EDTA络合剂用量，可计算钙的含量。

3.实训用品

(1)实验室常用玻璃仪器：高型烧杯(250mL)、微量滴定管(1mL或2mL)、碱式滴定管(50mL)、刻度吸管(0.5～1mL)等。

(2)电热板：1000～3000W。

(3)1.25mol/L KOH溶液：精确称取70.13gKOH，用水稀释至1000mL。

(4)10g/1氰化钠溶液：称取1.0g氰化钠，用水稀释至100mL。

(5)0.05mol/L柠檬酸钠溶液：称取14.7g柠檬酸钠(Na₃C₆H₅O₄·2H₂O)，用水稀释至1000mL。

(6)混合酸消化液：硝酸+高氯酸=4+1。

(7)20g/L氧化镧溶液：称取23.45g氧化镧(纯度大于99.99%)，先用少量水润湿再加75mL盐酸于1000mL容量瓶中，加去离子水稀释至刻度。

(8)EDTA溶液：准确称取4.50g EDTA(乙二胺四乙酸二钠)，用水稀释至1000mL，储存于聚乙烯瓶中，4℃保存。使用时稀释10倍即可。

(9)钙标准溶液：准确称取0.1248g碳酸钙(纯度大于99.99%，105～110℃烘干2h)，加20mL水及3mL0.5mol/L盐酸溶解，移入500ml，容量瓶中，加水稀释至刻度，储存于聚乙烯瓶中，4℃保存。此溶液每1mL相当于100ug钙。

(10)钙红指示剂：称取0.1g钙红指示剂(C₂₁O₇N₂SH₁₄)，用水稀释至100mL，溶解后即可使用。储存于冰箱中可保持一个半月以上。

注：所有玻璃仪器均以硫酸-重酸钾洗液浸泡数小时，再用洗衣粉洗刷后，用水反复冲洗，最后用去离子水冲洗，自然干燥或烘干，方可使用。

4.安全提醒

(1)氰化物是剧毒物质，必须在碱性条件下使用，以防止在酸性条件下生成HCN逸出。测定完成的废液要加氢氧化钠和硫酸亚铁处理，使生成亚铁氰化钾后才能倒掉。

(2)试样消化时，会产生大量有害气体，应在通风橱中进行；操作初期会产生大量的泡沫外溢，需要随时照管；操作中注意控制火力，不要将酸烧干，以免发生危险。

5.操作步骤

(1)试样处理

①试样制备：鲜样(如蔬菜、水果、鲜鱼、鲜肉等)先用自来水冲洗干净后，再用去离子水充分洗净。干粉类试样(如面粉、乳粉等)取样后立即装入容器密封保存，防止空气中的灰尘和水分污染。

②试样消化：精确称取均匀干试样0.5～1.5g(湿样2.0～4.0g，饮料等液体试样5.0～10.0g)于250mL高型烧杯，加混合酸消化液20～30ml，上盖表面皿，置于电热板或沙浴上加热消化。如未消化好而酸液过少时，再补加几毫升混合酸消化液，继续加热消化，直至无色透明为止。加几毫升水，加热以除去多余的硝酸。待烧杯中液体接近2～3mL，取下冷却。用20g/L的氧化镧溶液洗并转移至10mL刻度试管中，定容至刻度。

取与消化试样相同量的混合酸消化液，按上述操作做试剂空白试验测定。

(2)测定

①标定EDTA溶液：吸取0.5mL钙标准溶液，以EDTA滴定，标定其EDTA的浓度，根据滴定结果计算出每毫升EDTA相当于钙的质量，即滴定度(T)。

②试样及空白滴定：分别吸取0.1～0.5mL(根据钙的含量而定)试样消化液及空白于试管中，加1滴氰化钠溶液和0.1mL柠檬酸钠溶液，用滴定管加1.5mL 1.25mol/L KOH溶液，加3滴钙红指示剂，立即以稀释10倍的EDTA溶液滴定，至指示剂由紫红色变为蓝色为止。

6.结果计算

式中x——试样中钙的含量，mg/100g

T——EDTA滴定度，mg/mL

V——滴定试样时所用EDTA量，mL

V₀——滴定空白时所用EDTA量，mL

f——试样稀释倍数

m——试样质量，g

计算结果表示到小数点后两位。

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值10%。

7.要点提示

(1)本方法的线性范围为5～50ug。

(2)试样制备过程中应特别注意防止各种污染。所用设备如电磨、绞肉机、匀浆机、粉碎机等必须是不锈钢制品。所用容器必须使用玻璃或聚乙烯制品，做钙测定的试样不得用石磨研碎。

(3)实验中加入氰化钠作为络合滴定中的掩蔽剂，在pH>8的溶液中，氰化物可以掩蔽Cu²⁺、Ni²⁺、Co²⁺、Hg²⁺、Cd²⁺、Ag⁺、Fe²⁺、Zn²⁺等离子的干扰。加入柠檬酸钠可以掩蔽Fe³⁺，并防止钙和磷结合形成磷酸钙沉淀。

(4)滴定时pH应为12～14，过高或过低会使指示剂变红，可能滴不出终点。

(5)加钙红指示剂后，不能放置过久，否则终点发灰，不明显。

(6)配位滴定终点颜色变化较慢，若直接滴定至纯蓝色EDTA易过量。应先滴定至蓝紫色，然后滴加半滴并摇动至溶液变为纯蓝色。

文章来源：《食品理化检测技术》