1.原理
氨基酸因含—COOH与—NH2而具有两性。当加入甲醛溶液时，—NH2与甲醛结合，而使其碱性消失，这样就可以用强碱标准溶液来滴定—COOH，并用间接的方法测定氨基酸总量。因采用两种指示剂，故称为双指示剂甲醛滴定法。
2.试剂
(1)中性甲醛溶液(40%)：以百里酚酞作指示剂，用氢氧化钠将40%甲醛中和至淡蓝色。
(2)百里酚酞乙醇溶液(1g/L)。
(3)中性红50%乙醇溶液(1g/L)。
(4)NaOH标准溶液(0.1mol/L)。
3.仪器
实验室常用仪器。
4.操作方法
移取含氨基酸20～30mg的样品溶液2份，分别置于250mL锥形瓶中，各加50mL蒸馏水，其中1份加入3滴中性红指示剂，用0.1mol/L NaOH 标准溶液滴定至由红变为琥珀色为终点；另1份加入3滴百里酚酞指示剂及中性甲醛20mL，摇匀，静置1min，用0.1mol/L NaOH标准溶液滴定至淡蓝色为终点。分别记录2次所消耗的碱液体积。
5.结果计算
式中x——氨基酸态氮的质量分数，%
c——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L
V1——用中性红作指示剂滴定时消耗氢氧化钠标准溶液体积，mL
V2——用百里酚酞作指示剂滴定时消耗氢氧化钠标准溶液体积，mL
m——测定用样品溶液相当于样品的质量，g
0.014——1/2N2的毫摩质量，g/mmol
6.要点提示
(1)此法适用于测定食品中的游离氨基酸。
(2)固体样品应先进行粉碎，准确称样后用水萃取，然后测定萃取液。液体试样如酱油、饮料等可直接吸取试样进行测定。萃取可在50℃水浴中进行0.5h即可。
(3)若样品颜色较深，可加适量活性炭脱色后再测定，或用电位滴定法进行测定。
(4)与本法类似的还有单指示剂(百里酚酞)甲醛滴定法，此法用标准碱完全中和——COOH时的pH为8.5～9.5，但分析结果稍偏低，即双指示剂法的结果更准确。
文章来源：《食品理化检测技术》
